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幾種特殊的光學(xué)顯微鏡及區(qū)別

時(shí)間:2021-01-28      點(diǎn)擊次數(shù):6828
  今天我們要介紹幾種特殊的光學(xué)顯微鏡和不同光學(xué)顯微鏡之前的區(qū)別。
 
  摘要
 
  1.暗視野顯微鏡
 
  2.體視顯微鏡
 
  3.熒光顯微鏡
 
  4.相差顯微鏡
 
  5.倒置顯微鏡
 
  6.偏光顯微鏡
 
  1暗視野顯微鏡
 
  暗視野顯微鏡不具備觀察物體內(nèi)部的細(xì)微結(jié)構(gòu)的功能,但可以分辨0.004μm以上的微粒的存在和運(yùn)動(dòng)。因而常用于觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運(yùn)動(dòng)等。
 
  暗視野顯微鏡的基本原理是丁達(dá)爾效應(yīng)。當(dāng)一束光線透過黑暗的房間,從垂直于入射光的方向可以觀察到空氣里出現(xiàn)的一條光亮的灰塵“通路”,這種現(xiàn)象即丁達(dá)爾效應(yīng)。
 
  暗視野顯微鏡在普通的光學(xué)顯微鏡上換裝暗視野聚光鏡后,由于該聚光器內(nèi)部拋物面結(jié)構(gòu)的遮擋,照射在待檢物體表面的光線不能直接進(jìn)入物鏡和目鏡,僅散射光能通過,因而視野是黑暗的。
 
  暗視野顯微鏡的基本使用方法如下:
 
  1.安裝暗視野聚光器(或用厚實(shí)的黑紙片制成遮光板,放在普通顯微鏡的聚光器下方,也能得到暗視野效果)。
 
  2.選用強(qiáng)光源,一般用顯微鏡燈照明,以防止直射光線進(jìn)入物鏡。
 
  3.在聚光器和玻片之間加一滴香柏油,避免照明光線于聚光鏡上進(jìn)行全反射,達(dá)不到被檢物體,而得不到暗視野照明。
 
  4.進(jìn)行中心調(diào)節(jié),即水平移動(dòng)聚光器,使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴(yán)格位于一直線上。升降聚光器,將聚光鏡的焦點(diǎn)(圖1-2中圓錐光束的頂點(diǎn))對(duì)準(zhǔn)待檢物。
 
  5.選用與聚光器相應(yīng)的物鏡,調(diào)節(jié)焦距,按普通顯微鏡的方法操作。
 
  2體視顯微鏡
 
  體視顯微鏡又稱實(shí)體顯微鏡或解剖鏡,其成像為正立三維的空間影像,并具有立體感強(qiáng)、成像清晰寬闊、長(zhǎng)工作距離(通常為110mm)以及連續(xù)放大觀看等特點(diǎn)。生物學(xué)上常用于解剖過程中的實(shí)時(shí)觀察
 
  奧特光學(xué)SZ680/810體視顯微鏡
 
  普通光學(xué)顯微鏡的光源為平行光,因而形成的是二維平面影像;而體視顯微鏡采用雙通道光路,雙目鏡筒中的左右兩光束具有一定的夾角體視角(一般為12o15o),因而能形成三維空間的立體圖像。
 
  體視顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡的使用方法相近,但更為便捷。二者的主要區(qū)別在于:
 
  1.體視顯微鏡的鏡檢對(duì)象可不必制作成裝片。
 
  2.體視顯微鏡載物臺(tái)直接固定在鏡座上,并配有黑白雙面板或玻璃板,操作者可根據(jù)鏡檢的對(duì)象和要求加以選擇。
 
  3.體視顯微鏡的成像是正立的,便于解剖操作。
 
  4.體視顯微鏡的物鏡僅一只,其放大倍數(shù)可通過旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)螺旋連續(xù)調(diào)節(jié)。
 
  3熒光顯微鏡
 
  熒光顯微鏡是利用細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)發(fā)射的熒光強(qiáng)度對(duì)其進(jìn)行定性和定量研究的一種光學(xué)工具。
 
  細(xì)胞內(nèi)的熒光物質(zhì)物質(zhì)有兩類,一類直接經(jīng)紫外線照射后即可發(fā)熒光,如葉綠素等;另有一些物質(zhì)本身不具這一性質(zhì),但如果以特定的熒光染料或熒光抗體染色,經(jīng)紫外線照射后亦可發(fā)熒光
 
  正置生物熒光顯微鏡/倒置生物熒光顯微鏡
 
  熒光顯微鏡的原理為利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源(如超高壓汞燈),經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光(如紫外光3650λ或紫藍(lán)光4200λ)作為激發(fā)光,激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各色的熒光后,再通過物鏡后面的阻斷(或壓制)濾光片的過濾,后經(jīng)由目鏡的放大作用加以觀察。
 
  阻斷濾光片的作用有二:一是吸收和阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡以免干擾熒光和損傷眼睛;二是選擇并讓特定的熒光透過,表現(xiàn)出專一的熒光色彩。
 
  熒光顯微鏡按照光路原理可分為兩種:
 
  1.透射式熒光顯微鏡
 
  較為舊式的熒光顯微鏡,其激發(fā)光源通過聚光鏡穿過標(biāo)本材料來激發(fā)熒光。其優(yōu)點(diǎn)是低倍鏡時(shí)熒光強(qiáng),而缺點(diǎn)是隨放大倍數(shù)增加其熒光減弱。所以它僅適用于觀察較大的標(biāo)本材料。
 
  2.落射式熒光顯微鏡
 
  激發(fā)光從物鏡向下落射到標(biāo)本表面,即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。
 
  光路中需加上一個(gè)雙色束分離器(分色鏡),它與光軸呈45o角,激發(fā)光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時(shí)進(jìn)入物鏡,返回到雙色束分離器,使激發(fā)光和熒光分開,殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要。
 
  此種熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數(shù)愈大熒光愈強(qiáng)。
 
  4相差顯微鏡
 
  相差顯微鏡是能將光通過物體時(shí)產(chǎn)生的相位差(或光程差)轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹?光強(qiáng)度)變化的顯微鏡。主要用于觀察活細(xì)胞、不染色的組織切片或缺少反差的染色標(biāo)本。
 
  人眼只能鑒別可見光的波長(zhǎng)(顏色)和振幅的變化,不能鑒別相位的變化。而大多數(shù)生物標(biāo)本高度透明,光波通過后振幅基本不變,僅存在相位的變化。
 
  相差顯微鏡基本把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射,偏離了原來的光路,同時(shí)被延遲了1/4λ(波長(zhǎng)),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強(qiáng),振幅增大或減下,提高反差。
 
  從結(jié)構(gòu)上看,相差顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡不同之處在于:
 
  1.環(huán)形光闌具有環(huán)形開孔的光闌,安裝在光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,聚焦到標(biāo)本上。
 
  2.相位板相差顯微鏡在物鏡內(nèi)部增加了涂有氟化鎂的相位板,作用是將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。相板上有兩個(gè)區(qū)域,直射光通過的部分叫“共軛面”,衍射光通過的部分叫“補(bǔ)償面”。相位板按工作效果分為兩種類型:
 
  (1)A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸后光波疊加,振幅加大,標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加明亮,形成亮反差(或稱負(fù)反差)。
 
  (2)B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸后光波相減,振幅變小,標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加暗淡,形成暗反差(或稱正反差)。帶有相板的物鏡叫相差物鏡,常在物鏡外殼上以“Ph”字樣。
 
  合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡
 
  相差顯微鏡配備有一個(gè)合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡(在外殼上標(biāo)有“CT”符號(hào)),用于調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌的像與相板共軛面*吻合,以便實(shí)現(xiàn)對(duì)直射光和衍射光的特殊處理。
 
  使用時(shí)撥去一側(cè)目鏡,插入合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡,調(diào)節(jié)合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡的焦點(diǎn),視野中會(huì)呈現(xiàn)兩個(gè)圓環(huán),分別是明亮的環(huán)狀光闌圓環(huán)與較暗的相板上共軛面圓環(huán)。再轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器上的環(huán)狀光闌的兩個(gè)調(diào)節(jié)螺旋,使兩環(huán)*重疊。如明亮的光環(huán)過小或過大,可調(diào)節(jié)聚光器的升降旋鈕,使兩環(huán)*吻合。如果聚光器已升到高點(diǎn)或降到低點(diǎn)而仍不能矯正,說明玻片太厚了,應(yīng)更換。調(diào)好后即可取下合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡,換回目鏡。
 
  綠色濾光片
 
  用于調(diào)整光源的波長(zhǎng)。照明光線的波長(zhǎng)不同,會(huì)引起相位的變化,為了獲得良好的相差效果,相差顯微鏡要求使用波長(zhǎng)范圍比較窄的單色光,通常是用綠色濾光片來調(diào)整。
 
  相差顯微鏡的使用步驟如下:
 
 ?、俑鶕?jù)待檢標(biāo)本的性質(zhì)及要求,挑選適合的相差物鏡。
 
 ?、趯?biāo)本玻片放到載物臺(tái)上,進(jìn)行光軸中心的調(diào)整。
 
  ③使用合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡,調(diào)整環(huán)狀光闌與相板上的共軛面圓環(huán)*重疊吻合后,換回目鏡。在觀察過程中,每次更換物鏡倍數(shù)時(shí),必須重新進(jìn)行環(huán)狀光闌與相板共軛面圓環(huán)吻合的調(diào)整。
 
 ?、芗泳G色濾光片,按普通光學(xué)顯微鏡的操作步驟進(jìn)行觀察。
 
  5倒置顯微鏡
 
  倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)和普通顯微鏡基本相同,只不過物鏡與照明系統(tǒng)位置交換,前者在載物臺(tái)之下,后者在載物臺(tái)之上。主要用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞,需配制相差物鏡。
 
  奧特光學(xué)BDS500倒置生物顯微鏡
 
  6偏光顯微鏡
 
  偏光顯微鏡可用于檢測(cè)具有雙折射性的物質(zhì),如染色體、膠原、纖維絲等。
 
  奧特光學(xué)BK-POL投射偏光顯微鏡
 
  奧特光學(xué)BK-POL透反射偏光顯微鏡
 
  和普通顯微鏡不同的是:
 
  ①偏光顯微鏡光源前配備偏振鏡(起偏器),使進(jìn)入顯微鏡的光線為偏振光。
 
 ?、阽R筒中有檢偏振鏡(檢偏器,一個(gè)偏振方向與起偏器垂直的的起偏器)。
 
 ?、凼褂眯D(zhuǎn)載物臺(tái)。當(dāng)載物臺(tái)上放入單折射的物質(zhì)時(shí),無論如何旋轉(zhuǎn)載物臺(tái),由于兩個(gè)偏振片是垂直的,顯微鏡里看不到光線,而放入雙折射性物質(zhì)時(shí),由于光線通過這類物質(zhì)時(shí)發(fā)生偏轉(zhuǎn),因此旋轉(zhuǎn)載物臺(tái)便能檢測(cè)到這種物體。
 
 ?、芘鋫溲a(bǔ)償器或相位片;
 
 ?、菔褂脽o應(yīng)力物鏡。

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